Kit PCR Direttu di Sangue

Amplificazione rapida di u genu di destinazione aduprendu direttamente u sangue cum'è mudellu senza estrazione.

Questu kit adotta una DNA polimerasi anti-inibitore geneticamente modificata per amplificà efficacemente i geni di copia unica in u genomu umanu. U sistema tampone ben ottimizatu in questu kit aiuta a polimerasi à resistere fermamente à l'inibizione di inibitori di PCR, cusì pò amplificà direttamente l'ADN aduprendu sangue è cellule cultivate cum'è mudelli. Stu pruduttu hè faciule da operà è ùn richiede micca passi cumplicati cum'è purificazione di DNA o pretrattamentu di campioni.
Questu kit hè furnitu cum'è 2 × MasterMix, è a reazione pò esse effettuata semplicemente aghjunghjendu u mudellu di sangue è i primer di rilevazione corrispondenti. Pò esse applicatu nantu à e cellule cultivate di mammiferi cume umani, topi, porchi, bovini è altre spezie, oltre à sangue interu frescu o 4 ℃ criopreservatu, anticoagulante (EDTA, citrato, eparina), coaguli di sangue liquefatti è macchie di sangue secche almacenatu nantu à e carte cummerciale Whatman 903 è FTA Elute.

Cat. Innò Dimensione di l'embiu
4992529 20 µl × 100 rxn
4992530 20 µl × 500 rxn

Dettaglio di u Produttu

Esempiu Sperimentale

FAQ

Tags produttu

Caratteristiche

■ Semplice è veloce: l'amplificazione PCR pò esse realizata direttamente aduprendu u sangue cum'è mudellu, senza a necessità di e fatiganti tappe di preparazione di campioni è di estrazione di DNA.
■ Alta purezza: U saltu di u pre-trattamentu di i campioni è i passi di estrazione di l'ADN ponu aiutà à evità a cuntaminazione croce di i campioni.
■ High throughput: L'identificazione PCR per campioni à grande scala pò esse realizata cumbinendu u kit cù piastre PCR 96/384-pozzu.
■ Forte universalità: Stu kit pò amplificà efficacemente frammenti GC elevati o frammenti cù una struttura secundaria cumplessa, è a lunghezza di amplificazione pò ghjunghje sin'à 5 kb.
■ Forte resistenza à u stress: Questu kit pò esse applicatu per varie spezie è campioni di sangue cunservati in modi diversi.

Applicazioni

I prudutti PCR di stu kit cuntenenu "A" à a fine 3', chì pò esse adupratu direttamente per a clonazione di vettori TA. Questu kit pò esse adupratu per l'amplificazione di frammenti di DNA genomicu, analisi genetica di grande trasmissione è analisi di genotipazione (cume a rilevazione di geni).

Tutti i prudutti ponu esse persunalizati per ODM / OEM. Per i dettagli,per piacè cliccate Serviziu persunalizatu (ODM / OEM)


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    Experimental Example Utilizendu l'anticoagulazione EDTA umana cum'è mudellu, i geni 4 cù cuntenuti GC sfarenti sò stati amplificati da u Kit di PCR di Sangue Direttu. U sistema di reazione PCR era di 20 μl, è 1 μl di sangue era adupratu cum'è mudellu.
    M: TIANGEN Marker II; 1: Fragment size 1090 bp, cuntenutu GC 68,1%; 2: Fragment size 1915 bp, cuntenutu GC 70,4%; 3: Dimensione di u frammentu 448 bp, cuntenutu GC 74,8%; 4: Fragment size 1527 bp, cuntenutu GC 61,5%.
    Risultati sperimentali: U kit di PCR direttu di sangue pò amplificà efficacemente frammenti di DNA cù u cuntenutu di GC à a gamma di 61,5% -74,8%, suggerendu chì hè capace di amplificà frammenti ad alto GC.
    Experimental Example Utilizendu l'anticoagulazione EDTA umana cum'è mudellu, i geni 5 cù lunghezze sfarente (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 è Hn4.0) sò stati amplificati da Blood PCR Kit. U sistema di reazione PCR era di 20 μl, è 1 μl di sangue era adupratu cum'è mudellu.
    M: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 campioni di sangue diversi; NTC: cuntrollu senza primer. Risultati sperimentali: U kit di PCR di sangue direttu pò amplificà frammenti cù a lunghezza finu à 4 kb, suggerendu chì hè capace di amplificà frammenti lunghi.
    Experimental Example Utilizendu l'anticoagulazione EDTA umana cum'è mudellu, u Kit PCR Direttu di Sangue hè statu adupratu per a rilevazione PCR di diversi campioni di sangue. U sistema di reazione PCR era di 20 μl, è 1 μl di sangue era adupratu cum'è mudellu.
    M: TIANGEN Marker II; 1-9: a quantità di carica di sangue hè 0,1 μl, 0,2 μl, 0,3 μl, 0,4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl è 5 μl, rispettivamente; NTC: cuntrollu senza mudellu
    Risultati sperimentali: U kit di PCR direttu di sangue hà una forte resistenza à u sangue è pò amplificà i campioni di sangue cù u campu di carica di 0,1-5 μl.
    Experimental Example Campioni di sangue da umani, ratti, polli è altre spezie cù trattamenti diversi sò stati aduprati cum'è mudelli. U kit di PCR direttu di sangue hè statu adupratu per amplificà PRNP (umanu, 750 bp), Actin (rat, 200 bp), è β-Actin (Chicken, 1,0 kb). U sistema di reazione PCR era di 20 μl, è 1 μl di sangue era adupratu cum'è mudellu. M: TIANGEN Marker II.
    Risultati sperimentali: U Kit PCR di Sangue Direttu pò esse applicatu nantu à una vasta gamma di campioni, è a rilevazione diretta di PCR pò esse effettuata nantu à campioni di sangue di varie spezie cù trattamenti diversi.
    Q: Nisuna banda d'amplificazione

    Template A-1

    ■ U mudellu cuntene impurità di proteine ​​o inibitori di Taq, ecc. - Purificà u mudellu di DNA, elimina impurità di proteine ​​o estratta DNA di mudellu cù kit di purificazione.

    ■ A denaturazione di u mudellu ùn hè micca cumpleta -—Aumentà adeguatamente a temperatura di denaturazione è allungà u tempu di denaturazione.

    ■ Degradazione di u mudellu ——Riprepara u mudellu.

    A-2 Primer

    ■ Scarsa qualità di primure -—Risintetizza a primura.

    ■ Primer degradation ——Aliquot the primers high concentration in small volume for preservation. Evite parechje congelazioni è scongelamenti o criopreservati à longu andà à 4 ° C.

    ■ Cuncepimentu impropriu di primer (per esempiu, a lunghezza di primer ùn hè micca sufficiente, dimer furmatu trà primer, ecc.) -Primers di redisignazione (evità a furmazione di dimeri di primu è di struttura secondaria)

    A-3 Mg2+cuncentrazione

    ■ Mg2+ a cuncintrazione hè troppu bassa - -Aumenta propiu Mg2+ cuncintrazioni: Ottimizà u Mg2+ concentrazione da una seria di reazzioni da 1 mM à 3 mM cun un intervallu di 0,5 mM per determinà u Mg ottimale2+ cuncentrazione per ogni mudellu è primer.

    A-4 Temperatura di ricottura

    ■ L'alta temperatura di ricottura influenza u ligame di u primer è di u mudellu. ——Riduce a temperatura di ricottura è ottimisate a cundizione cun un gradiente di 2 ° C.

    A-5 Tempu di prulungazione

    ■ Tempu di prulungazione cortu —— Aumenta u tempu di prulungazione.

    Q: Falsa pusitiva

    Fenomeni: I campioni negativi mostranu ancu e bande di sequenza target.

    A-1 Cuntaminazione di PCR

    ■ Cuntaminazione incrociata di a sequenza di destinazione o di i prudutti di amplificazione - Ùn fate micca pipetta cù u campionu chì cuntene a sequenza di destinazione in u campione negativu o sparghjeli fora di u tubu di centrifuga. I reagenti o l'attrezzatura devenu esse autoclavati per eliminà l'acidi nucleici esistenti, è l'esistenza di contaminazione deve esse determinata per mezu di esperimenti di cuntrollu negativu.

    ■ Cuntaminazione di i reagenti ——Aliquot the reagents and store at low temperature.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ a cuncintrazione hè troppu bassa - -Aumenta propiu Mg2+ cuncintrazioni: Ottimizà u Mg2+ concentrazione da una seria di reazzioni da 1 mM à 3 mM cun un intervallu di 0,5 mM per determinà u Mg ottimale2+ cuncentrazione per ogni mudellu è primer.

    ■ Cuncepimentu impropriu di prima, è a sequenza di destinazione hà omulugia cù a sequenza micca di destinazione. —— Primarii di cuncepimentu di novu.

    Q: Amplificazione non specifica

    Fenomeni: E bande d'amplificazione PCR sò incoerenti cù a dimensione prevista, sia grande sia chjuca, o qualchì volta si verificanu sia bande d'amplificazione specifiche sia bande d'amplificazione non specifiche.

    A-1 Primer

    ■ Scarsa specificità di primu

    —— Primariu di cuncepimentu di novu.

    ■ A cuncintrazione di prima hè troppu alta - Aumenta propiu a temperatura di denaturazione è prolunga u tempu di denaturazione.

    A-2 Mg2+ cuncentrazione

    ■ U Mg2+ a cuncintrazione hè troppu alta - Riduce propiu a concentrazione Mg2 +: Ottimizà u Mg2+ concentrazione da una seria di reazzioni da 1 mM à 3 mM cun un intervallu di 0,5 mM per determinà u Mg ottimale2+ cuncentrazione per ogni mudellu è primer.

    A-3 Polimerasi termostabile

    ■ Quantità eccessiva di enzimi ——Riduce a quantità di enzimi adeguatamente à intervalli di 0,5 U.

    A-4 Temperatura di ricottura

    ■ A temperatura di ricottura hè troppu bassa - Aumenta in modo adeguatu a temperatura di ricottura o adopra u metudu di ricottura in duie tappe

    A-5 cicli di PCR

    ■ Troppu cicli di PCR -—Riduce u numeru di cicli di PCR.

    Q: Patchy o fasgiuli

    A-1 Primer——Povira specificità ——Risignate u primer, cambiate a pusizione è a lunghezza di u primer per migliurà a so specificità; o eseguite PCR nidificata.

    A-2 Template DNA

    ——U mudellu ùn hè micca puru ——Purificà u mudellu o estratti DNA cù kit di purificazione.

    A-3 Mg2+ cuncentrazione

    ——Mg2+ a cuncintrazione hè troppu alta - Riduce propiu Mg2+ cuncintrazioni: Ottimizà u Mg2+ concentrazione da una seria di reazzioni da 1 mM à 3 mM cun un intervallu di 0,5 mM per determinà u Mg ottimale2+ cuncentrazione per ogni mudellu è primer.

    A-4 dNTP

    ——A cuncintrazione di dNTP hè troppu alta ——Riduce a cuncentrazione di dNTP in modu adattu

    A-5 Temperatura di ricottura

    ——Temperatura di bassa ricottura ——Aumentà adeguatamente a temperatura di ricuitura

    Cicli A-6

    —— Troppu cicli ——Optimize u numeru di ciclu

    Q: Quantu DNA mudellu deve esse aghjuntu in un sistema di reazione di 50 μl PCR?
    ytry
    Q: Cumu amplificà frammenti lunghi?

    U primu passu hè di sceglie a polimerasa adatta. A polimerasi regulare Taq ùn pò micca ripruduce a causa di a mancanza di attività di esonucleasi 3'-5 ', è u disaccordu riduce notevolmente l'efficienza di l'estensione di i frammenti. Dunque, a polimerasi Taq regulare ùn pò micca amplificà efficacemente frammenti di destinazione più grandi di 5 kb. A polimerasa Taq cun mudificazione speciale o altra polimerasa ad alta fideltà deve esse scelta per migliurà l'efficienza di l'estensione è risponde à i bisogni di amplificazione di frammenti lunghi. Inoltre, l'amplificazione di frammenti lunghi richiede ancu un adattamentu currispundente di cuncezzione di primer, tempu di denaturazione, tempu di estensione, pH tampone, ecc. Per prevene i danni à u mudellu, u tempu di denaturazione à 94 ° C deve esse riduttu à 30 sec o menu per ciclu, è u tempu per elevà a temperatura à 94 ° C prima di l'amplificazione deve esse menu di 1 min. Inoltre, impostà a temperatura di estensione à circa 68 ° C è cuncepisce u tempu di estensione secondu a frequenza di 1 kb / min pò assicurà una amplificazione efficace di frammenti lunghi.

    Q: Cumu migliurà a fideltà di amplificazione di PCR?

    U tassu di errore di l'amplificazione PCR pò esse riduttu aduprendu diverse polimerasi di DNA cù alta fedeltà. Frà tutte e polimerasi di DNA Taq truvate fin'à avà, l'enzima Pfu hà u più bassu tassu d'errore è a più alta fideltà (vede a tola aghjunta). Oltre à a selezzione di l'enzimi, i ricercatori ponu riduce ulteriormente a velocità di mutazione PCR ottimizendu e cundizioni di reazione, cumprese l'ottimisazione di a cumpusizione tampone, a concentrazione di polimerasi termostabile è l'ottimisazione di u numeru di ciclu PCR.

    Scrivi quì u to missaghju è mandatelu