Kit RNAclean

A-1 Lisi cellulare o omogeneizazione ùn basta

---- Riduce l'usu di campioni, aumentate a quantità di tampone di lisi, aumentate l'omogeneizazione è u tempu di lisi.

A-2 A quantità di campione hè troppu grande

---- Riduce a quantità di campione adupratu o cresce a quantità di tampone di lisi.

A-1 Lisi o omogeneizazione di cellule insufficienti

---- Riduce l'usu di campioni, aumentate a quantità di tampone di lisi, aumentate l'omogeneizazione è u tempu di lisi.

A-2 A quantità di campione hè troppu grande

---- Per piacè riferitevi à a capacità massima di trasfurmazione.

A-3 RNA ùn hè micca eluitu cumpletamente da a colonna

---- Dopu avè aghjuntu acqua RNase-Free, lasciate qualchì minutu prima di centrifugà.

A-4 Etanolu in l'eluente

---- Dopu u lavatu, centrifugate di novu è caccià u tampone di lavatu u più pussibule.

A-5 U mezu di cultura cellulare ùn hè micca cumpletamente eliminatu

---- Quandu si raccoglie e cellule, assicuratevi di rimuovere u mezu di cultura u più pussibule.

A-6 E cellule immagazzinate in RNAstore ùn sò micca centrifugate in modu efficace

---- A densità di RNAstore hè più grande chì u mediu mediu di cultura cellulare; dunque a forza centrifugale deve esse aumentata. Hè suggeritu di centrifugà à 3000x g.

A-7 Basso contenutu di RNA è abbondanza in u campione

---- Aduprate un campione pusitivu per determinà se u bassu rendimentu hè causatu da u campione.

A-1 U materiale ùn hè micca frescu

---- I tessuti freschi devenu esse conservati in azotu liquidu immediatamente o immediatamente messi in u reagente RNAstore per assicurà l'effettu di l'estrazione.

A-2 A quantità di campione hè troppu grande

---- Riduce a quantità di campione.

A-3 RNase contaminazionen

---- Ancu se u buffer furnitu in u kit ùn cuntene RNase, hè faciule di cuntaminà RNase durante u prucessu di estrazione è deve esse trattatu cun cura.

A-4 Inquinamentu da elettroforesi

---- Sostituite u buffer di elettroforesi è assicuratevi chì i consumabili è u Buffer di Caricamentu sò liberi di cuntaminazione RNase.

A-5 Troppu caricu per l'elettroforesi

---- Riduce a quantità di carica di campioni, a carica di ogni pozzu ùn deve supera i 2 μg.

A-1 A quantità di campione hè troppu grande

---- Riduce a quantità di campione.

A-2 Alcuni campioni anu un elevatu cuntenutu di DNA è ponu esse trattati cù DNase.

---- Eseguite u trattamentu DNase senza RNase à a soluzione RNA ottenuta, è l'ARN pò esse direttamente usatu per sperimenti successivi dopu u trattamentu, o pò esse ulteriormente purificatu da kit di purificazione RNA.

Per vetri, cottu à 150 ° C per 4 ore. Per contenitori di plastica, immersi in 0,5 M NaOH per 10 min, poi accuratamente risciacquati con acqua priva di RNase e poi sterilizzati per rimuovere completamente RNase. I reagenti o e soluzioni aduprate in l'esperimentu, in particulare l'acqua, devenu esse liberi di RNase. Aduprate acqua senza RNase per tutti i preparati di reagenti (aghjunghjite acqua à una buttiglia di vetru pulita, aghjunghjite DEPC à una concentrazione finale di 0,1% (V / V), scuzzulate a notte è autoclave).