U DNA purificatu pò esse adupratu direttamente in varie operazioni cunvinziunali, cumprese a digestione enzimatica, PCR, custruzzioni di biblioteche, Southern blot è altri esperimenti.
■ Deparaffinizazione in macchina: E fasi di deparaffinizazione è di estrazione ponu esse cumpletate in autumàticu semplicemente mettendu campioni incubati di paraffina non trattata in a cartuccia di reagenti è dopu aghjunghjendu Sula Oil è Proteinase K.
■ Risultati affidabili: U DNA di u genomu ottenutu hè liberu da RNA è da cuntaminazione di e proteine, è pò esse adupratu direttamente per PCR o fluorescenza quantitativa PCR.
■ Sicuri è inofensivi: Ùn sò micca necessarii solventi organichi chì sò dannosi per u corpu umanu cum'è u cloroformu fenolicu.
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I risultati mostranu chì per campioni di grande volume, i rendimenti di l'estrazione di i dui metudi eranu paragunabili; per i campioni cù vulume mediu è chjucu, u rendiment di u metudu di deparaffinizazione in un passu (eseguite cun TGuide) era più grande di quellu di u metudu di deparaffinizazione cunvinziunale. Dunque, u metudu di deparaffinizazione in un passu simplifica micca solu l'operazione, riduce u risicu, ma migliora ancu l'efficienza di l'estrazione. Nota: Campione di grande volume: a zona di sezzione hè in 2,5-4 cm2 è u spessore hè in 5-20 μm. Campione di volume mediu: a zona di sezzione hè in 1,5-2,5 cm2 è u spessore hè in 5-20 μm. Campione di picculu volume: a zona di sezzione hè in 0,2-1,5 cm2 è u spessore hè in 5-20 μm. |
A-1 Concentrazione bassa di cellule o virus in u campione di partenza - Arricchisce a concentrazione di cellule o virus.
A-2 Lisi insufficiente di i campioni - I campioni ùn sò micca stati mischiati bè cù u tampone di lisi. Hè suggeritu di mischjà accuratamente per impulsu-vortexing per 1-2 volte. -Lisi cellulare insufficiente causata da a diminuzione di l'attività di a proteinasi K. -Lisi cellulare insufficiente o degradazione di e proteine per via di un tempu di bagnu caldu insufficiente. Hè suggeritu di taglià u tissutu in picculi pezzi è allargà u tempu di bagnu per eliminà tutti i residui in u lisatu.
A-3 Assorbimentu di DNA insufficiente. -Nisun etanolu o bassa percentuale invece di 100% etanolu hè statu aghjuntu prima chì u lisatu sia trasferitu à a colonna di spin.
A-4 U valore di pH di u tampone d'eluzione hè troppu bassu. -Aghjusteghja u pH trà 8,0-8,3.
Etanolu residuale in l'eluente.
-Ci hè un tampone di lavatu residuale PW in l'eluente. L'etanolu pò esse eliminatu centrifugendu a colonna di spin per 3-5 min, è dopu piazzendu à temperatura ambiente o incubatrice da 50 for per 1-2 min.
A-1 U campionu ùn hè micca frescu. -Estratti un campione d'ADN pusitivu cum'è cuntrollu per determinà se l'ADN in u campione hè degradatu.
A-2 Pre-trattamentu impropriu. -Causatu da una macinazione eccessiva di azotu liquidu, da u recuperu di l'umidità, o da una quantità troppu grande di u campione.
I pretrattamenti devenu variare per campioni sfarenti. Per i campioni di piante, assicuratevi di macinà bè in azotu liquidu. Per campioni d'animali, omogeneizà o macinà bè in azotu liquidu. Per i campioni cù pareti cellulari chì sò difficiuli à rompe, cume i batteri G + è u lievitu, si suggerisce di aduprà lisozima, liticasi o metudi meccanichi per rompe i muri cellulari.
4992201/4992202 U Kit di DNA Genomicu vegetale adotta un metudu basatu in colonna chì richiede cloroformu per l'estrazione. Hè particolarmente adattatu per vari campioni di piante, è ancu per a polvere secca di e piante. Hi-DNAsecure Plant Kit hè ancu basatu in colonna, ma senza bisognu di estrazione di fenol / cloroformu, rendendulu sicuru è micca tossicu. Hè adatta à e piante cù un altu cuntenutu di polisaccaridi è polifenoli. 4992709/4992710 DNAquick Plant System adotta un metudu à basa di liquidu. L'estrazione di fenol / cloroformu ùn hè micca necessaria ancu. A procedura di purificazione hè simplice è rapida senza limite per i campioni di iniziali, cusì l'utenti ponu adattà a quantità in modo flessibile secondu i requisiti sperimentali. Grande taglia di frammenti di gDNA pò esse ottenuta cun elevatu rendimentu.
L'estrazione di DNA di coaguli di sangue pò esse effettuata aduprendu i reagenti forniti in questi dui kit semplicemente cambiendu u protocolu per l'istruzzioni specifiche per l'estrazione di DNA di coaguli di sangue. A copia dolce di u protocolu di estrazione di DNA di coaguli di sangue pò esse rilasciata à a dumanda.
Suspende u campionu frescu cù 1 ml di PBS, soluzione salina normale o tampone TE. Omogeneizà cumpletamente u campione da un omogeneizzatore è raccoglie u precipitatu finu à u fondu di un tubu per centrifugazione. Eliminate u supernatante, è risuscite u precipitatu cù 200 μl buffer GA. A seguente purificazione di DNA pò esse realizata secondu l'istruzzioni.
Per a purificazione di gDNA in plasma, sieri è campioni di fluidi corporei, TIANamp Micro DNA Kit hè raccomandatu. Per a purificazione di u virus gDNA da campioni di siero / plasma, hè raccomandatu u TIANamp Virus DNA / RNA Kit. Per a purificazione di gDNA battericu da campioni di siero è plasma, si raccomanda TIANamp Bacteria DNA Kit (lisozima deve esse inclusa per batteri positivi). Per campioni di saliva, u Kit di DNA Hi-Swab è u Kit di DNA TIANamp Bacteria sò raccomandati.
U Kit vegetale DNAsecure o u Sistema vegetale DNAquick sò raccomandati per l'estrazione di u genomu fungicu. Per l'estrazione di u genomu di u lievitu, hè raccomandatu u TIANamp Yeast DNA Kit (a lyticase deve esse preparata da sè).
Dapoi a so creazione, a nostra fabbrica hà sviluppatu prudutti di prima classe mundiale cun rispettendu u principiu
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